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集中于T細(xì)胞的許多基礎(chǔ)和臨床免疫研究包括增殖測定，都是為了確定T細(xì)胞是否能夠在不同的體外或體內(nèi)條件下增殖。流式細(xì)胞儀術(shù)是測量T細(xì)胞增殖的理想方法，現(xiàn)在有一套染色產(chǎn)品，可以在現(xiàn)有的流式細(xì)胞儀染色板中加入增殖染料。與所有流式細(xì)胞術(shù)染色步驟一樣，一定要做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定染色試劑的用量和確定采集的細(xì)胞數(shù)，在下一個(gè)T細(xì)胞實(shí)驗(yàn)確定使用其中的一個(gè)染色方案來檢測細(xì)胞的增殖。胞內(nèi)熒光染色：羧基熒光素二乙酸酯琥珀酰亞胺酯（CFSE）或類似的熒光染料是可以進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)的。在增殖期間，隨著細(xì)胞分裂熒光染料的濃度也隨之稀釋
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多聚甲醛固定后，白細(xì)胞的免疫表型通常會(huì)有所變化。而且，在固定之后，對細(xì)胞表面Marker的熒光穩(wěn)定性也會(huì)產(chǎn)生很大影響。為了獲得不同表面Marker的熒光穩(wěn)定性，了解固定后細(xì)胞的光散射特性和射門以及固定細(xì)胞后產(chǎn)生自發(fā)熒光是非常必要的。在固定細(xì)胞0、2、4、6、24、48、96h后，用FITC標(biāo)記抗體對全血進(jìn)行染色測定。通過檢測可溶性熒光素當(dāng)量分子(MESF)來定量分析熒光強(qiáng)度。結(jié)果顯示出，固定作用48h后，細(xì)胞大?。‵SC）和細(xì)胞顆粒度(SSC)能夠引起顯著的下降，在單核細(xì)胞中，固定作用96h后，
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免疫磁珠（Immunomagneticbead,IMB）技術(shù)是20世紀(jì)80年代出現(xiàn)的技術(shù)方法。以免疫學(xué)為基礎(chǔ)，滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域，其在免疫檢測、細(xì)胞分離、生物大分子純化和分子生物學(xué)等方面有著越來越廣泛的使用。免疫磁珠的結(jié)構(gòu)：磁珠是由核心金屬顆粒（Fe2O3,Fe3O4）,核心外層包裹的高分子材料（如聚苯乙烯、聚氯乙烯）和zui外層的功能配基（如-NH2，-COOH、-OH、-CHO）組成。免疫磁珠在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用：1.細(xì)胞分選免疫磁珠細(xì)胞分選可在幾分鐘
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流式細(xì)胞儀已經(jīng)成為臨床醫(yī)生、免疫學(xué)家和細(xì)胞生物學(xué)家*的工具，這項(xiàng)技術(shù)在不斷進(jìn)步。流式細(xì)胞儀的多參數(shù)細(xì)胞分析這一*的功能讓大多數(shù)細(xì)胞分析成為了可能。Coon首先提出了熒光抗體標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的目的蛋白技術(shù)，在20世紀(jì)80年代，細(xì)胞亞群僅僅通過檢測單一的細(xì)胞表面標(biāo)志物來確定，使用的單抗和熒光素很受限制?；虮磉_(dá)技術(shù)的誕生和新的單抗以及熒光素的獲得使更復(fù)雜的多參數(shù)分析成為可能。1.常用熒光素的種類及特性1）.FITC（Fluorescein）又稱異硫氰酸熒光素，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光
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貼壁、懸浮、原代細(xì)胞感染Protocol及常見問題解答
慢病毒是當(dāng)前zui熱門的基因操作工具，其感染譜廣，可有效地感染腫瘤細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而為基因功能的研究提供了更強(qiáng)有力的工具。然而仍有一部分細(xì)胞，尤其是原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞由于細(xì)胞特性，很難獲得的感染效率。為了提高細(xì)胞的感染效率，我們常常選擇多加病毒或使用Polybrene等助感染試劑，然而細(xì)胞狀態(tài)卻變差了，且增加感染效率并沒有達(dá)到理解的效果，這是什么原因呢？一、對慢病毒感染出現(xiàn)的問題進(jìn)行原因分析1.細(xì)胞狀態(tài)變差——細(xì)胞毒性雜質(zhì)：病毒溶液中殘留的雜質(zhì)蛋白 -
PCR擴(kuò)增反應(yīng)完成之后，必須通過嚴(yán)格的鑒定，才能確定是否真正得到了準(zhǔn)確可靠的預(yù)期特定擴(kuò)增產(chǎn)物。凝膠電泳是檢測PCR產(chǎn)物常用和zui簡便的方法，能判斷產(chǎn)物的大小，有助于產(chǎn)物的鑒定。凝膠電泳常用的有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳，前者主要用于DNApian段大于100bp者，后者主要用來檢測小片段DNA。1．瓊脂糖凝膠電泳這是實(shí)驗(yàn)室zui常用的方法，簡便易行，只需少量DNA即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其原理是不同大小的DNA分子通過瓊脂糖凝膠時(shí)，由于泳動(dòng)速度不同而被分離，經(jīng)溴化乙錠（EB）染色，在紫外光照射下
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PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆可以：（1）獲得目的DNA片段；（2）用于原核表達(dá)的研究；（3）廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)相關(guān)研究。平端連接法實(shí)驗(yàn)方法原理平頭連接是將制備好的平頭載體和補(bǔ)平或削平的PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行連接。載體可用EcoRV或SmaI切成平頭；PCR產(chǎn)物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用該酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求不高，PCR產(chǎn)物也可不加處理。如果使用Stratagene公司的pfuDNA聚合酶或NewEnglandBiolabs公司的V
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方法一A液：1M，MnCl2：B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用無菌水配，配后不需滅菌；C液稱取CaCl20.10g，KCl1.18g，全部轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶，然后加入46ml三蒸水，輕輕振蕩使所有組分充分溶解。將瓶塞蓋上并用牛皮紙、棉線包扎，然后放入滅菌鍋121℃高壓滅菌備用。取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混勻后，再用1ml移液器加入3.3mlA液，混勻冰浴即可使用。劃線得到單菌落,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)約17小時(shí)，挑取2-4個(gè)形態(tài)飽滿的單菌落接種于裝有100mlS
