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免疫印跡（Western Blot）的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟
WesternBlot原理WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。SDS-PAGE可對蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行分離，轉(zhuǎn)移到固相載體——例如硝酸纖維素薄膜（NC）上。固相載體可以吸附蛋白質(zhì)，并保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。轉(zhuǎn)移后的NC膜就稱為一個(gè)印跡（blot），用蛋白溶液（如5%BSA或脫脂奶粉溶液）處理，封閉NC膜上的疏水結(jié)合位點(diǎn)。用目標(biāo)蛋白的抗體（一抗）處理NC膜——只有待研究的蛋白質(zhì)才能與一抗特異結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，這 -
轉(zhuǎn)錄組是某個(gè)物種或者特定細(xì)胞類型產(chǎn)生的所有轉(zhuǎn)錄本的集合，轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)是zui近發(fā)展起來的利用深度測序技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄分析的方法,可以對全轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行系統(tǒng)的研究。RocheGSFLXTitanium、IlluminaSolexaGAIIx和ABSOLID4均可以對轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序，RocheGSFLXTitanium與IlluminaSolexaGAIIx和ABSOLID4相比，擁有更長的讀長和較小的數(shù)據(jù)量，適用于表達(dá)量較高基因的RNA全長測序。但是對低表達(dá)豐度的基因，可能需要多次測序才能
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恒溫金屬浴采用微電腦控制和半導(dǎo)體制冷技術(shù)制造的一款恒濕儀產(chǎn)品，控濕精度高，制樣平行性好,儀器可配置多種模塊，可廣泛各種分析儀器樣品的保存、各種酶的保存和反應(yīng)、核酸和蛋白質(zhì)的變性處理、PCR反應(yīng)、電泳的預(yù)變性和血清凝固，各種產(chǎn)品材料的老化等。行業(yè)行業(yè)遍及醫(yī)藥、化工、食品安全、質(zhì)檢、環(huán)境等。恒溫金屬浴如何操作：1、熱塊預(yù)熱：給熱塊加熱20分鐘，使熱塊溫度均勻，紅燈亮為加溫，綠燈亮為恒溫，溫度表指示的是熱塊的測量溫度。2、設(shè)定溫度：用旋鈕調(diào)節(jié)到需要的溫度值，面板上的示值為設(shè)定溫度值。3、接通電源：檢查
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流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)處理與分析
數(shù)據(jù)的顯示通?？煞譃橐痪S單參數(shù)直方圖（histogramplot）、二維點(diǎn)圖（dotplot）、二維等高圖（contour）和假三維圖（pseudo3D）等。下面簡述zui常用的單參數(shù)直方圖和二維點(diǎn)圖。1.單參數(shù)直方圖單參數(shù)直方圖是一維數(shù)據(jù)用得zui多的圖形，可用來進(jìn)行定性分析和定量分析。橫坐標(biāo)表示熒光信號或散射光信號強(qiáng)度的相對值，其單位用“道數(shù)”（channel）表示，橫坐標(biāo)可以是線性的，也可以是對數(shù)的?？v坐標(biāo)通常代表細(xì)胞出現(xiàn)的頻率或相對細(xì)胞數(shù)。下面以研究細(xì)胞周期為例說明如何分析單參數(shù)直方圖所 -
JayHaronPh.D.jaydotharonatgmaildotcomBDBiosciences,SanDiego,UnitedStates引用實(shí)驗(yàn)材料和方法從1968年zui早的商品化流式細(xì)胞術(shù)(FC)和熒光激活細(xì)胞分類術(shù)(FACS)誕生以來,它們已得到大大改進(jìn)。但要成為實(shí)驗(yàn)室廣泛接受的技術(shù)，除成本因素外，還存在不少障礙。技術(shù)上的問題主要是細(xì)胞內(nèi)低豐度分子的檢測，缺少“通用”細(xì)胞通透物質(zhì)，細(xì)胞自發(fā)熒光的干擾效應(yīng)，熒光分子間發(fā)射光譜的重疊，以及缺少可識別目標(biāo)分子的試劑。特別是對于細(xì)胞分揀來說
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細(xì)胞培養(yǎng)中的污染分為兩類，化學(xué)污染和生物污染?；瘜W(xué)污染化學(xué)污染是一些對細(xì)胞有毒性的或?qū)?xì)胞產(chǎn)生刺激的化學(xué)物質(zhì)。這些污染一般來自于沒有洗凈的器皿、不純的化學(xué)試劑和質(zhì)量較差的蒸餾水等。化學(xué)污染中比較引人注意的是細(xì)菌內(nèi)毒素。它是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞死亡后解體釋放出的疏水性的細(xì)胞壁組成物質(zhì)，對塑料等疏水性強(qiáng)的物質(zhì)有很強(qiáng)的吸附能力。細(xì)菌內(nèi)毒素可刺激部分細(xì)胞產(chǎn)生一些激素或細(xì)胞因子，對細(xì)胞生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。細(xì)菌內(nèi)毒素是臨床上的zui主要的熱原（即注射到動(dòng)物體內(nèi)會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)熱），所以通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的疫苗、
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1.什么是凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)？凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA復(fù)合物或RNA復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢
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菌落PCR分析克隆的重組體實(shí)驗(yàn)試劑、試劑盒溴化乙錠Taq延伸PCR添加劑Tween2010%溶液dNTP溶液PCR緩沖液熱穩(wěn)定DNA聚合酶引物儀器、耗材無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備和試劑實(shí)驗(yàn)步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq延伸PCR添加劑（Stratagene)Tween20，10%溶液2.酶和酶緩沖液dNTP溶液（包含所有的4種dNTP，每種都是25mmol/L)PCR緩沖液，10X,用戶買熱穩(wěn)定聚合酶時(shí)公司一并提供，或者PCR優(yōu)化緩沖液，比如，Opti-PrimePCR優(yōu)化試劑
