FlowSight 量化成像分析流式細(xì)胞儀

生命科學(xué)的研究已進(jìn)入了細(xì)胞組學(xué)的研究，科學(xué)家們渴求探究細(xì)胞深層次和綜合性信息，既提供細(xì)胞群體的群體信息，也關(guān)注個(gè)體細(xì)胞的差異，既能看到細(xì)胞表型的特點(diǎn)，更能研究細(xì)胞的功能，但目前的流式細(xì)胞技術(shù)已無法滿足科學(xué)家們的應(yīng)用需求。Merck Millipore公司2012年推出的FlowSight多維全景流式細(xì)胞儀一次實(shí)現(xiàn)了從群體到個(gè)體，從表型到功能的綜合細(xì)胞分析，流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)入了嶄新的時(shí)代。
 

FlowSight是下一代專家級(jí)流式細(xì)胞儀
FlowSight是一款體積小巧，但是功能強(qiáng)大的下一代專家級(jí)流式細(xì)胞儀。該系統(tǒng)革命性地設(shè)計(jì)提高了信噪比以及熒光檢測(cè)的靈敏度。標(biāo)配12個(gè)檢測(cè)通道，除了傳統(tǒng)熒光強(qiáng)度信息，還能獲得“每個(gè)細(xì)胞”的明場(chǎng)、暗場(chǎng)以及10個(gè)熒光圖像。FlowSight可以多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），并加配785nm激光器于SSC信號(hào)檢測(cè)，同時(shí)還可配置96孔板自動(dòng)上樣系統(tǒng)（AutoSampler）。FlowSight具有低于10MESF的超高檢測(cè)靈敏度，特別對(duì)于弱信號(hào)的檢測(cè)，有明顯的優(yōu)勢(shì)。
 

FlowSight突破傳統(tǒng)流式局限，實(shí)現(xiàn)圈門不再靠猜
FlowSight與其他傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀不同之處在于它帶來了每個(gè)細(xì)胞的真實(shí)圖像。對(duì)于每個(gè)細(xì)胞，它能夠生成12張圖片。所獲得的圖片能夠鑒別來自細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜和細(xì)胞核的熒光。您只需點(diǎn)擊散點(diǎn)圖中的每個(gè)點(diǎn)或直方圖中的每個(gè)點(diǎn)，即可查看與之對(duì)應(yīng)的細(xì)胞圖片。因此使用者再也不用靠猜測(cè)來判斷設(shè)門是否準(zhǔn)確。在FlowSight中，設(shè)門后，使用者可以通過觀察所設(shè)門內(nèi)外的細(xì)胞圖片來確認(rèn)設(shè)門是否準(zhǔn)確。

FlowSight拓展了流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用范圍，獲得好的深入的細(xì)胞信息
1. 細(xì)胞周期細(xì)化分析
FlowSight可以將細(xì)胞周期分析和有絲分裂細(xì)胞分析結(jié)合起來。如下圖所示，研究人員利用FlowSight對(duì)THP-1細(xì)胞周期進(jìn)行分析（如下圖左圖所示），通過觀察每個(gè)時(shí)期的細(xì)胞圖片，F(xiàn)lowSight不僅可以分析細(xì)胞的G0/G1,S,G2/M期，還可將M期細(xì)分為分裂前期，中期，晚期，末期，獲得全面的細(xì)胞周期數(shù)據(jù)。
 

2. 八色免疫分型
免疫分型通常用來鑒別血細(xì)胞亞群。FlowSight多能夠同時(shí)檢測(cè)10色熒光，大程度地滿足研究者的實(shí)驗(yàn)需求。在這個(gè)例子中，研究人員用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗體以及DAPI染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。通過一系列設(shè)門分析，他們鑒別了以下細(xì)胞類群： (A) CD3+ T細(xì)胞, CD4+ 輔助T細(xì)胞; (B) CD16+ 粒細(xì)胞; (C) CD19+ B 細(xì)胞; (D) CD14+ 單核細(xì)胞; (E) CD123+ pDC/嗜堿性粒細(xì)胞.

3．NFkB核轉(zhuǎn)位研究
NF-κβ作為一種廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子，被激活由胞漿轉(zhuǎn)入胞核，從而參與炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等?？梢詫⒓?xì)胞核和NF-κβ分別用DAPI和FITC染色，F(xiàn)lowSight可觀察每個(gè)細(xì)胞是否發(fā)生 NF-κβ核轉(zhuǎn)位，并量化分析NFkB核轉(zhuǎn)位程度以及發(fā)生核轉(zhuǎn)位細(xì)胞的比例。

FlowSight革命性地光路設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)*應(yīng)用
FlowSight系統(tǒng)平臺(tái)也是由液流系統(tǒng)，光學(xué)系統(tǒng)和電子系統(tǒng)等三大部分組成。液流系統(tǒng)將樣本細(xì)胞懸液和系統(tǒng)鞘液注入流動(dòng)室中，使細(xì)胞在鞘液流的約束下聚焦在液流的中心，逐個(gè)流過檢測(cè)窗口。光學(xué)系統(tǒng)中光源照射通過檢測(cè)窗口的細(xì)胞，從而產(chǎn)生光信號(hào)。光源分為兩種，其一用于產(chǎn)生明場(chǎng)細(xì)胞圖像，另一種是用于產(chǎn)生熒光細(xì)胞圖像的激光器。光源照射細(xì)胞產(chǎn)生的光信號(hào)被大數(shù)值孔徑的物鏡收集，然后通過光路系統(tǒng)傳遞到由二向色鏡構(gòu)成的濾光片堆棧（Dichroic Filter Stack）。光信號(hào)在這里被分成不同波段投射到TDI CCD的相應(yīng)檢測(cè)通道上，產(chǎn)生一個(gè)明場(chǎng)細(xì)胞圖像，一個(gè)暗場(chǎng)細(xì)胞圖像（Side Scatter，SSC）及至多10個(gè)不同熒光通道的細(xì)胞圖像。FlowSight的光路系統(tǒng)能夠自動(dòng)調(diào)整焦距，并實(shí)時(shí)測(cè)定細(xì)胞運(yùn)動(dòng)速度，而其采用高航空遙拍CCD進(jìn)行信號(hào)采集，信噪比比PMT提高10-20倍，上述這些手段保證了系統(tǒng)采集到的細(xì)胞圖像的質(zhì)量和熒光信號(hào)的靈敏度。

 
綜上，F(xiàn)lowSight多維全景流式細(xì)胞儀，采用革命性的技術(shù)，解決了傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀無法獲得細(xì)胞個(gè)體信息的局限，真正讓流式細(xì)胞儀睜開了“眼睛”，不僅可以對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，而且還能觀察細(xì)胞形態(tài)，大地拓展了傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀的應(yīng)用。雖然FlowSight是在2011年推出的，但是Amnis公司的下一代流式技術(shù)已經(jīng)非常成熟，裝機(jī)已經(jīng)超過200臺(tái)，超過300篇文獻(xiàn)發(fā)表，其中大量Nature、Science和Blood等高水平文章。
 

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