適合于東亞結(jié)直腸癌患者的MSI檢測位點(diǎn)新研究

近日，腫瘤期刊《Future Oncology》發(fā)表的一篇題為“The clinicopathological features and prognosis of tumor MSI in East Asian colorectal cancer patients using NCI panel”文章，通過對東亞結(jié)直腸癌（CRC）患者不同MSI檢測位點(diǎn)進(jìn)行對比，確定出MSI檢測Panel，并對東亞結(jié)直腸癌MSI發(fā)生率，臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行分析總結(jié)。該研究由上海桐樹生物科技及相關(guān)2家臨床科研機(jī)構(gòu)共同完成，為MSI（微衛(wèi)星不穩(wěn)定性）在結(jié)直腸癌患者的診斷、臨床病理特征及預(yù)后意義等方面提供重要的臨床指導(dǎo)意義。

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本文研究人員采用兩種不同檢測位點(diǎn)測定MSI，并結(jié)合MMR蛋白免疫組化實(shí)驗和多元變量分析，探究東亞CRC患者M(jìn)SI的發(fā)生狀況及臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，研究主要得到以下發(fā)現(xiàn)：

●東亞CRC患者M(jìn)SI發(fā)生率略低于歐美人群，人群種族及基因多態(tài)性的不同，導(dǎo)致微衛(wèi)星重復(fù)系列存在差異。

●單核苷酸+雙核苷酸聯(lián)合Panel敏感性高于單純單核苷酸Panel，對于東亞裔CRC患者M(jìn)SI的檢測，單核苷酸+雙核苷酸聯(lián)合Panel更適合。

●東亞裔MSI的臨床病理特征與歐美人群基本一致，MSI-H好發(fā)于二期，近端、右半結(jié)腸部位，且分化較差伴有粘液成分的CRC患者。

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研究背景

結(jié)直腸癌（CRC）是常見的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計，每年約有 120 萬名患者被確診為結(jié)直腸癌，而有超過 60 萬名患者直接或間接死于結(jié)直腸癌。因此，結(jié)直腸癌已成為現(xiàn)階段威脅人類健康的重要疾病之一。近年來，隨著分子生物學(xué)及相關(guān)基因組學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)MSI在CRC的診斷和治療中扮演者極其重要的角色，如對CRC預(yù)后進(jìn)行判斷，指導(dǎo)5-氟*、伊立替康等*藥物的反應(yīng)，幫助診斷篩選Lynch綜合征等，MSI已成為結(jié)直腸癌預(yù)后和臨床輔助治療過程中一個重要分子標(biāo)志物。

對于結(jié)直腸癌MSI的檢測，早在2004年，美國國立癌癥研究中心（NCI）頒布了貝塞斯達(dá)（Bethesda）標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)在MSI檢測位點(diǎn)的選擇上規(guī)定了兩種方式：2個單核苷酸（BAT-25、BAT-26）+3個雙核苷酸（D5S346、D2S123、D17S250）聯(lián)合位點(diǎn)的NCI Panel或者5個單核苷酸（BAT-25、BAT-26、NR21、NR22、NR24）單純位點(diǎn)的Pentaplex Panel。盡管這兩種Panel均能準(zhǔn)確的檢測MSI，但經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，二者在檢測內(nèi)對照設(shè)置、MSI-L篩查、MSI判定標(biāo)準(zhǔn)等方面仍存在一定的差異和優(yōu)劣勢。近年來，隨著MSI相關(guān)研究的不斷深入，有研究報道針對東亞裔CRC患者M(jìn)SI表型檢測采用2個單核苷酸+3個雙核苷酸的聯(lián)合Panel可能更為適合，但這種觀點(diǎn)需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。為此本研究以東亞裔CRC患者為研究對象，采用兩種不同的位點(diǎn)對MSI進(jìn)行檢測，并采用MMR蛋白免疫組化對兩種方法進(jìn)行評估，旨在為MSI的檢測、臨床病理及預(yù)后提供一定的理論依據(jù)。

研究方法

本研究以245例東亞結(jié)直腸癌患者為研究對象，其中直腸癌62例，左半結(jié)腸癌107例，右半結(jié)腸癌40例，其他類型（包括橫結(jié)腸癌、橫結(jié)腸-乙狀結(jié)腸癌、乙狀結(jié)腸癌等）36例。

采用PCR和IHC對患者M(jìn)SI和MMR蛋白進(jìn)行檢測，在PCR檢測MSI過程中，位點(diǎn)選擇采用NCI Panel 和Pentaplex Panel兩種檢測方法對患者的MSI進(jìn)行檢測，并用免疫組化實(shí)驗評估MMR蛋白表達(dá)與兩種Panel檢測MSI間的一致性，同時通過多元變量分析MSI-H與臨床病理特征及相關(guān)基因突變信息的相關(guān)性，以此為CRC臨床診斷及預(yù)后評價提供更為完善的參考價值。

研究結(jié)果

1. MMR蛋白表達(dá)與MSI的相關(guān)性比較

目前，MMR蛋白的免疫組化分析（IHC）已成為臨床上檢測MSI的一種常用方法，通過檢測MLH1、MSH2、PMS2及 MSH6 4種蛋白表達(dá)，當(dāng)4種蛋白均為陽性時，則判讀為MMR-I（MMR蛋白完整），如果其中一個蛋白表達(dá)缺失則判讀為MMR-D（MMR蛋白缺失）。本研究通過采用IHC對患者4種蛋白檢測，發(fā)現(xiàn)共有28例患者為MMR-D，這28例患者12例（42.9%）為1個蛋白缺失，16例患者（57.1%）為兩個蛋白缺失。

對于MSI表型的檢測，我們分別采用NCI Panel和Pentaplex Panel兩種方法進(jìn)行檢測。在NCI Panel 檢測中我們發(fā)現(xiàn)有27例患者（11%）為MSI-H表型，2例患者（0.8%）為MSI-L表型，剩下216例患者（88.2%）為MSS表型；相比對于Pentaplex Panel檢測，結(jié)果顯示23例患者（9.4%）為MSI-H表型，1例患者（0.4%）為MSI-L表型，221例患者（90.2%）為MSS表型。值得注意的是，兩種方法均發(fā)現(xiàn)BAT-25、BAT-26是所有檢測位點(diǎn)中不穩(wěn)定的，檢測靈敏度均大于75%，如圖1。

圖1 兩種方法檢測5個MSI標(biāo)記位點(diǎn)的靈敏度和特異性

2. 不同方法測定MSI狀態(tài)的一致性比較

通過比較NCI Panel和Pentaplex Panel兩種方法的靈敏度和特異性（見表1），結(jié)果發(fā)現(xiàn)NCI Panel檢測的敏感性高于Pentaplex Panel檢測的敏感性，這提示NCI Panel檢測可能更適合于東亞裔患者。

表1 微衛(wèi)星標(biāo)記在無錯配修復(fù)蛋白表達(dá)檢測中的預(yù)測值

采用MMR IHC對兩種Panel進(jìn)行評估（見表2，表3），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與Pentaplex Panel相比，NCI Panel與dMMR的一致性可能更高（Kappa值0.898），這表明NCI Panel檢測能更好的反映MMR蛋白表達(dá)。

表2 免疫組化檢測MMR蛋白表達(dá)與NCI Panel檢測MSI間的一致性

表3 免疫組化檢測MMR蛋白表達(dá)與五個單核苷酸重復(fù)系列檢測MSI間的一致性

3. MSI-H與臨床病理特征

對于MSI-H與非MSI-H的患者進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)MSI-H患者與腫瘤分級、右側(cè)腫瘤位置、粘液組織類型相關(guān)，與患者年齡、TNM分期、BRAF突變、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)。

4. MMR蛋白表達(dá)、MSI狀態(tài)與結(jié)直腸癌預(yù)后

本研究對245名患者進(jìn)行為期24個月的隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MSI-H患者相比MSS / MSI-L患者有更長的無病生存期（DFS）（圖2），同樣，MMR蛋白表達(dá)缺失（MMR-D）患者較MMR蛋白表達(dá)完整（MMR-I）患者表型有有更長的無病生存期（DFS）。以上結(jié)論表明MMR-D和MSI-H是CRC患者的兩個獨(dú)立預(yù)后因素。

圖2 MSI表型與患者DFS間關(guān)系

結(jié)論

MSI是CRC診斷和治療領(lǐng)域中一個非常重要的生物標(biāo)記物，可準(zhǔn)確反映CRC病理學(xué)特征，同時對CRC的治療如5-氟**響應(yīng)也能提供一定的指導(dǎo)，本研究采用兩種不同的方法對MSI進(jìn)行檢測比較，并分析MMR蛋白表達(dá)、MSI-H與結(jié)直腸癌預(yù)后間的關(guān)系，得到以下結(jié)論：

（1） 本研究采用NCI Panel對東亞CRC患者M(jìn)SI進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)MSI-H約占11%，這一比例較歐美CRC患者（MSI-H約8-20%）略低，這可能與*的臨床病例特征，種族差異及基因多態(tài)性相關(guān)。

（2） 采用NCI Panel 、Pentaplex Panel對MSI進(jìn)行檢測，其中NCI Panel檢測分析靈敏度似乎更高，同時與IHC測得的MMR比較，NCI Panel檢測的一致性也更好，這可能與兩種方法的內(nèi)對照，cut-off值及MSI發(fā)生核苷酸位點(diǎn)相關(guān)。

（3） 本研究再次證實(shí)MSI對CRC患者的預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義，尤其是MSI-H患者，其無病生存期（DFS）較MSS/MSI-L患者更長，因此MSI-H是CRC治療預(yù)后的一個有效的標(biāo)志物。

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