PCR實(shí)驗(yàn)室功能與設(shè)備設(shè)計(jì)要點(diǎn)分析

(1)試劑儲(chǔ)備區(qū)

該區(qū)域主要完成試劑和主反應(yīng)混合液的儲(chǔ)存、配制和封裝工作。所有運(yùn)送到該區(qū)域的試劑和材料不應(yīng)經(jīng)過(guò)其他區(qū)域，試劑和原材料應(yīng)在本區(qū)內(nèi)儲(chǔ)存和制備。本區(qū)域的氣壓應(yīng)相對(duì)外界保持正壓。該區(qū)域的設(shè)備主要是冰箱、天平、混勻器、低速離心機(jī)、加樣器、可移動(dòng)紫外燈等。由于該區(qū)域有多種試劑，所以“安全”應(yīng)是平面設(shè)計(jì)首要考慮因素，平面設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)保持通風(fēng)流暢、逃生暢通。首先，實(shí)驗(yàn)臺(tái)布置在房間的兩側(cè)，中間的過(guò)道全部通向走廊便于疏散。同時(shí)根據(jù)人體工程學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)臺(tái)與實(shí)驗(yàn)臺(tái)通道設(shè)計(jì)為1500mm，中間的通道可滿足兩邊坐人中間過(guò)人的要求。

(2)標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域的功能是樣本的保存、核酸提取和貯存、樣本加入擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。樣本應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)并儲(chǔ)存在本區(qū)內(nèi)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。對(duì)于氣流壓力的控制，由于在本區(qū)內(nèi)加樣操作可能產(chǎn)生氣溶膠，為避免氣溶膠擴(kuò)散出去對(duì)外界造成污染，本區(qū)應(yīng)對(duì)外界保持負(fù)壓;同時(shí)本區(qū)相對(duì)于擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)以及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

該區(qū)域的設(shè)備主要是生物安全柜、加樣器、臺(tái)式高速離心機(jī)、臺(tái)式低速離心機(jī)、水浴鍋、冰箱、混勻器和可移動(dòng)紫外燈等。其中需要注意的是，生物安全柜選用B2型，這種生物安全柜所有的吸入氣流和垂直氣流都經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾后排到室外，不再進(jìn)入生物安全柜循環(huán)或者返回該區(qū)域，這種生物安全柜可避免提取核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間交叉“污染”，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

(3)擴(kuò)增區(qū)

該區(qū)域的功能是DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測(cè)定。此外，反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液和已制備的DNA模板(來(lái)自標(biāo)本制備區(qū))的加入等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。對(duì)于氣流壓力的控制，相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

該區(qū)域的設(shè)備主要是核酸擴(kuò)增熱循環(huán)儀、加樣器、超凈臺(tái)等。其中熱循環(huán)儀的電源應(yīng)，并配備一個(gè)穩(wěn)壓電源或UPS，以防止由于電壓的波動(dòng)對(duì)擴(kuò)增測(cè)定的影響。

(4)分析區(qū)

該區(qū)域的功能是擴(kuò)增產(chǎn)物的分析。該區(qū)域可能會(huì)用到某些可致基因突變的有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。對(duì)于氣流壓力的控制，該區(qū)域是PCR實(shí)驗(yàn)的zui后一步，壓力應(yīng)較低，相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。

該區(qū)域的設(shè)備主要是加樣器、電泳儀(槽)、電轉(zhuǎn)印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測(cè)序儀、酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等。