說說人表皮永生化細(xì)胞HACAT的培養(yǎng)步驟

2022

07-02

21:50:01

 111

來源：化工儀器網(wǎng)

　　說說人表皮永生化細(xì)胞HACAT的培養(yǎng)步驟。

　　1、復(fù)蘇細(xì)胞：在37℃水浴中快速搖動(dòng)裝有1mL細(xì)胞懸液的冷凍管融化，加入5mL培養(yǎng)基并充分混合。在1000RPM下離心5分鐘，棄去上清液，加入4-6mL*培養(yǎng)基并充分吹掃。然后將所有細(xì)胞懸浮液添加到培養(yǎng)瓶中，并培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸浮液添加到6cm皿中）并培養(yǎng)過夜。第二天換培養(yǎng)基，檢查細(xì)胞密度。

　　2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)到80％-90％，則可以傳代培養(yǎng)。

人表皮永生化細(xì)胞HACAT

　　對(duì)于貼壁人表皮永生化細(xì)胞HACAT ，傳代可參考以下方法：

　?。?）棄去培養(yǎng)上清液，并用不含鈣和鎂離子的PBS沖洗細(xì)胞1-2次。

　?。?）向培養(yǎng)瓶中加入1-2ml消化液（0.25％*-0.53mMEDTA），將其置于37℃的培養(yǎng)箱中1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化情況，如果大部分細(xì)胞旋轉(zhuǎn)并掉落后，迅速將其帶回*，輕敲培養(yǎng)瓶幾次，并加入5ml以上含10％血清的*培養(yǎng)基終止消化。

　　（3）輕輕吹干細(xì)胞，然后將其*吸出。以1000RPM離心8-10分鐘，棄去上清液，加入1-2mL培養(yǎng)基并充分吹掃。

　　（4）加入5-6ml/瓶培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶，其中裝有5-6ml培養(yǎng)液的比例為1：2至1：5。

　　對(duì)于懸浮人表皮永生化細(xì)胞HACAT，傳代可參考以下方法：

　?。?）收集細(xì)胞，以1000RPM離心8-10分鐘，棄去上清液，并加入1-2mL培養(yǎng)基吹凈，然后將細(xì)胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶，其中含有8ml培養(yǎng)基，比例為1：2至1：5。

　?。?）可以選擇一半的介質(zhì)更換方法。丟棄一半培養(yǎng)基后，懸浮剩余的細(xì)胞，然后將細(xì)胞懸浮液分成新的含有8ml培養(yǎng)基的細(xì)胞懸浮液，比例為1：2至1：3。在盤子或瓶子里。

　　3、細(xì)胞凍存：當(dāng)細(xì)胞生長良好時(shí)，可以將其冷凍保存。將貼壁細(xì)胞冷凍保存后，棄去培養(yǎng)基并加入少量*。細(xì)胞變成圓形并脫落后，通過離心收集它們。

全年征稿/資訊合作 聯(lián)系郵箱：137230772@qq.com

版權(quán)與免責(zé)聲明

1、凡本網(wǎng)注明"來源：興旺寶"的所有作品，版權(quán)均屬于興旺寶，轉(zhuǎn)載請(qǐng)必須注明興旺寶，http://m.dunya.com.cn/。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。

2、企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容，如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的，一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任，本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。

3、本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來源的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。

4、如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。