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小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)方法

2022
07-02

21:50:01

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277
來源:賽百慷(上海)生物技術股份有限公司

平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構成。它不構成獨立的器官,而只是成為構成體壁和內臟壁的因素(肌層)。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結構或中空器官;在功能上可以通過縮短和產生張力使器官發(fā)生運動和變形,也可產生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。

小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關.如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時,可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,表型也發(fā)生改變,由收縮型轉為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子;而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。

 

小鼠支氣管平滑肌細胞來源于實驗動物正常支氣管組織,長梭狀細胞,貼壁培養(yǎng)。通過平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為陽性鑒定純度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

1.試驗所需儀器設備及試劑

(1)儀器

儀器名稱

規(guī)格型號

廠家

生物安全柜

BSC-1500ⅡA2-X

濟南鑫貝西生物技術有限公司

CO2細胞培養(yǎng)箱

BC-J160S

上海博迅實業(yè)有限公司

熒光倒置顯微鏡

DS-Ri2

Nikon

高速冷凍離心機

Multifuge X1R

Thermo Fisher

電熱恒溫鼓風干燥箱

DHG-9123A

上海精宏實驗設備有限公司

(2)試劑耗材

試劑名稱

規(guī)格/貨號

廠家

T25細胞培養(yǎng)瓶

430639

Coming

血球計數(shù)板

Neubauer improved

Marienfeld

細胞培養(yǎng)孔板

WHB-24

上海臥宏生物科技有限公司

平滑肌細胞*培養(yǎng)基

PriMed-iCell-004

賽百慷(上海)生物技術股份有限公司

0.25%*(含0.02%EDTA)

1734858

Gibico

 

2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)

1) 取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中,

2) 剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中,

3) 在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管,

4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎,

5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化,

6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h,

7) 待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,充分吹打,

8) 過100目篩網,收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清,

9) 用*培養(yǎng)基重懸沉淀,鋪瓶。

除了上述的細胞分離方法以外,賽百慷還有很多關于其他細胞的分離方法,想要學習的小伙伴可以來賽百慷進行現(xiàn)場學習,如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法,可在購買相應的細胞過程中,贈送該細胞的分離方法及培養(yǎng)條件,想要了解更多,打電話或咨詢相關工作人員。

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