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人成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)制備方式

2022
07-02

21:50:01

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463
來(lái)源:賽百慷(上海)生物技術(shù)股份有限公司

 成纖維細(xì)胞屬于由中胚層分化而來(lái)的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來(lái)源于人正常的皮膚組織,成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞,由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng),它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。

       一般而言,成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì),并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。傷口修復(fù)時(shí),成纖維細(xì)胞由可增殖,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,可重塑基質(zhì)的表型,同時(shí),它們會(huì)分泌大量的透明質(zhì)酸來(lái)應(yīng)對(duì)修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng)。

       以下是賽百慷提供的一種人成纖維細(xì)胞的制備方式(僅供參考):
       1.首先在分離成纖維細(xì)胞時(shí)要做到在無(wú)菌條件下進(jìn)行,打開生物安全柜紫外燈30min作無(wú)菌處理。
       2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精,消毒2min,
       3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍,
       4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,
       5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,4℃冰箱過(guò)夜消化,
       6.第二天,用鑷子將表皮與分開(薄的那層是表皮,厚的那層是),
       7.將剪碎,移至離心管,用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定),
       8.用100 μm網(wǎng)篩過(guò)濾,
       9.取濾液,300 g,離心5 min,
       10.用*培養(yǎng)基重懸沉淀,
       11.鋪瓶,
       12.隔天換液。
       以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式,不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測(cè),采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)。細(xì)胞純度可高達(dá)于90%,所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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