EB注意事項(xiàng)

分子式：C21H20BrN3分子結(jié)構(gòu)
　　英文名：Ethidium bromide
　　分子量： 394.3139 g/mol
　　熔點(diǎn)：260 - 262 °C
　　為芳香族熒光化合物
　　EB（Ethidium bromide，溴化乙錠）
　　溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標(biāo)準(zhǔn)302nm 紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號，可用Polaroid 底片或帶CCD 成像頭的凝膠成像處理系統(tǒng)拍攝。
　　溴化乙錠可以嵌入堿基分子中,導(dǎo)致錯(cuò)配。溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑,具有高致癌性! 普通實(shí)驗(yàn)手套（淺黃色乳膠手套）不能很好的阻擋EB，需要用藍(lán)色實(shí)驗(yàn)用手套。
　　觀察瓊脂糖凝膠中DNA常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進(jìn)行染色，溴化乙錠含有一個(gè)可以嵌入DNA堆積堿基之間的一個(gè)三環(huán)平面基團(tuán)。它與DNA的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中，大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。當(dāng)染料分子插入后，其平面基團(tuán)與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互作用。這個(gè)基團(tuán)的固定位置及其與堿基的密切接近，導(dǎo)致與DNA結(jié)合的染料呈現(xiàn)熒光，其熒光產(chǎn)率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料，而被結(jié)合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種情況下，被吸收的能量在可見光譜紅橙區(qū)的590nm處重新發(fā)射出來。由于溴化乙錠-DNA復(fù)合物的熒光產(chǎn)率比沒有結(jié)合DNA的染料高出20-30倍，所以當(dāng)凝膠中含有游離的溴化乙錠（0.5ug/ml）時(shí)，可以檢測到少至10ng的DNA條帶。
　　溴化乙錠可以用來檢測單鏈或雙鏈核酸（DNA或RNA）。但是染料對單鏈核酸的親和力相對較小，所以其熒光產(chǎn)率也相對較低。事實(shí)上，大多數(shù)對單鏈DNA或RNA染色的熒光時(shí)通過染料結(jié)合到分子內(nèi)形成較短的鏈內(nèi)螺旋產(chǎn)生的。
　　由于在該染料存在的情況下，線狀DNA的電泳遷移率約降低15%，因此，當(dāng)需要知道DNA  pian段的準(zhǔn)確大小（如DNA限制酶酶切圖譜的鑒定）時(shí)，凝膠應(yīng)該在無EB情況下電泳，電泳結(jié)束后用EB染色。染色完畢后，通常不需要脫色。但是在檢測小量DNA（小于10ng）片段時(shí)，通常要將染色后的凝膠進(jìn)行脫色。
溴化乙錠的損害
　　溴化乙錠可以嵌入堿基分子中，導(dǎo)致錯(cuò)配。溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑，具有高致癌性！
　　SYBR Green I 和溴化乙啶（EB）Ames 測試結(jié)果顯示EB容易引起有機(jī)體突變。(Singer et al., Mutat. Res. 199, 439: 37- 47.)
溴化乙錠溶液的凈化處理
　　由于溴化乙錠具有一定的毒性，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對含EB的溶液進(jìn)行凈化處理再行棄置，以避免污染環(huán)境和危害人體健康。
　　(1) 對于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下處理：
　　①將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml；
　?、诩尤胍槐扼w積的0.5mol/L KMnO4，混勻，再加入等量的25mol/L HCl，混勻，置室溫?cái)?shù)小時(shí)；
　?、奂尤胍槐扼w積的2.5mol/L NaOH，混勻并廢棄。
　　(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下處理：
　?、?按1mg/ml的量加入活性炭，不時(shí)輕搖混勻，室溫放置1小時(shí)；
　?、?用濾紙過濾并將活性碳與濾紙密封后丟棄。