HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問(wèn)題
柱前衍生被測(cè)組分通過(guò)衍生化反應(yīng),轉(zhuǎn)化為衍生化產(chǎn)物,然后再經(jīng)過(guò)色譜柱進(jìn)行分離。液相色譜法中柱前衍生的目的是:通過(guò)衍生化反應(yīng),使原來(lái)不能直接被檢測(cè)的組分轉(zhuǎn)化為能被所用檢測(cè)器檢測(cè)的物質(zhì);使被測(cè)組分與衍生化試劑有選擇地參加反應(yīng),而與樣品中的其他組分分離;改變被測(cè)組分在色譜柱的出峰次序,使之更有利于分離。柱前衍生的點(diǎn)是可以不必嚴(yán)格限制衍生化反應(yīng)條件,可以允許較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間及使用各種形式的反應(yīng)器。其缺點(diǎn)是當(dāng)一個(gè)復(fù)雜組分樣品經(jīng)過(guò)衍生化反應(yīng)后,有可能產(chǎn)生多種衍生化產(chǎn)物,給色譜分離帶來(lái)困難。
柱后衍生利用衍生反應(yīng)使被測(cè)物與相應(yīng)的試劑反應(yīng),以改變其物理或化學(xué)性質(zhì),使其被檢測(cè)到。例如將發(fā)色基團(tuán)或熒光基團(tuán)鍵合到樣品中去,多放大檢測(cè)靈敏度,柱后衍生系統(tǒng)開(kāi)創(chuàng)了柱后衍生系統(tǒng)性能、價(jià)格及外形的標(biāo)準(zhǔn)。
HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問(wèn)題?1)為什么要衍生?2)衍生化的分類(lèi)?3)進(jìn)行衍生,適用的化合物有哪些?4)進(jìn)行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的缺點(diǎn)?
答:色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過(guò)程中用的化學(xué)試劑(一般稱(chēng)為衍生化試劑或標(biāo)記試劑)使樣品成分轉(zhuǎn)變相應(yīng)的衍生物之后進(jìn)行分離檢測(cè)或進(jìn)行檢測(cè)的方法。目的為:
1.將紫外—可見(jiàn)吸收功能基團(tuán)引入被檢測(cè)對(duì)象或?qū)⑵滢D(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌?,以提檢測(cè)靈敏度;
2.提對(duì)分析樣品的分離和選擇性。
從是否與HPLC系統(tǒng)聯(lián)機(jī)的角度,化學(xué)衍生法分為在線(xiàn)(on line)與離線(xiàn)(Off line)兩種。從發(fā)生衍生化的場(chǎng)合,分為柱前衍生法(pre-columnderivatization)與柱后衍生法(post-columnderivatization)兩種。
目前,在HPLC中,以離線(xiàn)的柱前衍生法(簡(jiǎn)稱(chēng)柱前衍生法)與在線(xiàn)的柱后衍生法(簡(jiǎn)稱(chēng)柱后衍生法)使用居多。
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