比色法是通過比較或測量有色物質(zhì)溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法,其是基于溶液對光的選擇性吸收而建立起來的。比色法的原理是根據(jù)被測物質(zhì)溶液的顏色或加入顯色劑后生成的有色溶液的顏色,顏色深度和物質(zhì)含量成正比,則根據(jù)光被有色溶液吸收的強(qiáng)度,即可測定溶液中物質(zhì)的含量。
比色分析具有簡單、快速、靈敏度高等特點(diǎn),可測定微量組分。目前,比色分析已成為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)和科學(xué)實(shí)驗(yàn)等方面的重要方法,幾乎可對所有的無機(jī)離子和許多有機(jī)化合物進(jìn)行直接或間接測定。
比色法常用的方法包括 目視比色法、光電比色法法,其也是多個(gè)土壤檢測標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。如NY/T 1121.8-2006《土壤檢測 第8部分:土壤有效硼的測定》、NY/T 1121.7-2006《土壤檢測 第7部分:酸性土壤有效磷的測定》、NY/T 1849-2010《酸性土壤銨態(tài)氮、有效磷、速效鉀的測定聯(lián)合浸提-比色法》等等。
第三次全國土壤普查工作正在緊鑼密鼓地開展,比色法成為土壤檢測中的“主力軍”。土壤檢測中,比色法具體應(yīng)用如下:
土壤有效硼的測定
依據(jù)NY/T 1121.8-2006《土壤檢測 第8部分:土壤有效硼的測定》。土壤中有效硼采用沸水提取,提取液用EDTA消除鐵、鋁離子的干擾,用高錳酸鉀消褪有機(jī)質(zhì)的顏色后,在弱酸性條件,以甲亞胺-H 比色法測定提取液中的硼量。
值得注意的是,加甲亞胺試劑時(shí)必須盡量準(zhǔn)確,因試劑本身顏色較深,影響吸光值。每批樣品標(biāo)準(zhǔn)系列必須重新測定。
土壤有效磷的測定
依據(jù)NY/T 1121.7-2006《土壤檢測 第7部分:酸性土壤有效磷的測定》。酸性土壤中的磷主要以Fe-P和Al-P形態(tài)存在,利用F-具有在酸性條件下溶解絡(luò)合Fe3+和Al3+的能力,使-定量具潛在活性的磷酸鐵磷酸鋁中的磷釋放出來。同時(shí)由于H+的作用亦溶解出部分活性較大的Ca-P中的磷。本方法嚴(yán)格規(guī)定土液比為1:10,浸提溫度為20℃ ~25℃ ,振蕩提取時(shí)間為30 min。所提取出的有效磷以鉬銻抗比色法測定。
該種方法所規(guī)定的酸度及鉬酸銨濃度下,鉬銻抗法顯色溫度以20C ~ 40C為宜,如室溫低于20C,可放置在30仁~ 40C烘箱中保溫30 min,取出冷卻后比色。
土壤銨態(tài)氮、有效磷、速效鉀的測定
依據(jù)NY/T 1849-2010《酸性土壤銨態(tài)氮、有效磷、速效鉀的測定聯(lián)合浸提-比色法》。聯(lián)合浸提劑中的Na+可以與土壤膠體表面的NH4+和K+進(jìn)行交換,連同水溶性離子一起進(jìn)入溶液。酸性土壤中的磷主要以Fe-P和Al- P形態(tài)存在,利用F在酸性溶液中絡(luò)合Fe3+和Al3+的能力,使一定量的比較活性的磷酸鐵、磷酸鋁中的磷釋放出來,同時(shí)由于H+的作用亦溶解出部分活性較大的Ca- P中的磷。
浸出液中的銨離子與納氏試劑反應(yīng)生成黃色物質(zhì),在一定濃度范圍內(nèi),其顏色深淺與溶液中銨態(tài)氮含量成正比,在420nm波長下測定。浸出液中的磷酸鹽與酸化的鉬酸銨溶液生成磷鉬雜多酸,遇氯化亞錫被還原成-種深藍(lán)色絡(luò)合物磷鉬藍(lán),其顏色深淺與磷含量成正比,在685nm波長下測定。浸出液中的鉀離子與四苯硼鈉作用,生成穩(wěn)定的四苯硼鉀沉淀,使溶液變混濁,在一定濃度范圍內(nèi),濁度與溶液中鉀含量成正比,在685nm波長下測定。
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