光學顯微鏡是生命科學、醫(yī)學、材料學等多個領(lǐng)域不可或缺的研究工具。物鏡是顯微鏡的核心器件,決定了顯微成像的兩個關(guān)鍵參數(shù):分辨率和成像視場。物鏡的成像視場和分辨率往往是相互制約的,具備亞微米分辨率物鏡的成像視場往往被限制在1mm左右。近年來,跨尺度高通量的成像需求日益增長,常規(guī)顯微物鏡無法同時滿足大視場高分辨的成像特性。介觀顯微物鏡具有復雜的光學結(jié)構(gòu)與優(yōu)秀的像差優(yōu)化,可以同時實現(xiàn)高數(shù)值孔徑和超大的成像視場,能顯著提升光學顯微鏡的成像通量。目前的介觀物鏡成像波段單一,僅能進行可見光或近紅外單波段成像,無法滿足多樣化熒光成像的要求。此外,現(xiàn)有介觀物鏡成像視場直徑集中在3mm-6mm,而越來越多的應用場景需要進一步提升介觀物鏡的成像視場,以獲取更高的成像通量。
近期,蘇州醫(yī)工所史國華團隊設(shè)計了介觀視場下的平場復消色差物鏡結(jié)構(gòu),研制出已報道的亞微米分辨率下,成像視場最大,工作波段最寬的介觀顯微物鏡,并搭建相關(guān)單光子/雙光子成像系統(tǒng)(圖1)。該物鏡具備8mm視場直徑,0.5NA數(shù)值孔徑,且成像波段可達400-1000nm。利用該物鏡對小鼠腦及腎切片成像,獲得了單幀13.5億像素的超高通量圖像(圖2a)。與20倍0.5NA的商業(yè)物鏡進行定量對比,結(jié)果顯示該介觀物鏡與商業(yè)物鏡具備相似的成像質(zhì)量,卻擁有超過商業(yè)物鏡40倍的成像視場面積;并且首次在同一個物鏡上實現(xiàn)單、雙光子介觀成像(圖2b)。實驗結(jié)果表明,該物鏡在大尺度樣本高分辨多波段成像方向具有重大潛力,如腦圖譜繪制,跨腦區(qū)單、雙光子成像,類器官高分辨成像等。
該工作以“Large-field objective lens for multi-wavelength microscopy at mesoscale and submicron resolution”為題發(fā)表于期刊Opto-Electronic Advances(中國科學院一區(qū))。論文第一作者為博士生徐欣,通訊作者為史國華研究員。該研究獲得國家重點研發(fā)計劃、中國科學院穩(wěn)定支持基礎(chǔ)研究青年團隊計劃等項目的支持。
圖1 介觀物鏡結(jié)構(gòu)及成像系統(tǒng)結(jié)構(gòu)
圖2 生物樣本成像結(jié)果
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