人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒特性
◎選擇正規(guī)廠家,產(chǎn)品經(jīng)相應(yīng)政府部門審核認(rèn)可,試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。
◎靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力;2)為試劑對(duì)大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力。
◎特異性:常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測(cè)物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng),使測(cè)定結(jié)果升高,可能導(dǎo)致假陽(yáng)性,所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。
◎精密度:ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍。
◎準(zhǔn)確度:通過(guò)添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
◎簡(jiǎn)便性:指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下,實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好,在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了,定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單。
◎安全性:指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無(wú)害無(wú)傳染性。
◎經(jīng)濟(jì)性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本,而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。
◎試劑評(píng)價(jià):需要有的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測(cè)。
操作程序總結(jié)
準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘
洗板5次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘
洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘
加入終止夜
15分鐘內(nèi)讀OD值
人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的AC-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的AC-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
3. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
7. 底物請(qǐng)避光保存。
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