苜?;ㄈ~病病毒(AMV)ELISA試劑盒
操作基本步驟:
1、 試劑準(zhǔn)備:所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2、 加樣:加樣或加試劑時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)。*設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實驗。
3、 溫育:為防止樣品蒸發(fā),實驗時將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi),以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。
4、 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5、 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配制使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請精確 配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配制(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10 ),以避免由于不準(zhǔn)確稀 釋而造成濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。
6、 反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7、 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
抗原檢測的意義可做為抗原進(jìn)行檢測的物質(zhì)可分為以下四類:
( 1)各種微生物及其大分子產(chǎn)物:用于傳染病診斷、微生物的分類及鑒定以及對菌苗、疫苗的研究。
(2)生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì):包括各種血清蛋白(如各類免疫球蛋白、補(bǔ)體的各種成分)、可溶性血型物質(zhì)、多肽類激素、細(xì)胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進(jìn)行檢測。在對這些成分的生物學(xué)作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。
(3)人和動物細(xì)胞的表面分子:包括細(xì)胞表面各種分化抗原(如CD抗原)、同種異型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相關(guān)抗原和腫瘤相關(guān)性情抗原等。檢測這些抗原對各種細(xì)胞的分類、分化過程及功能研究、對各種與免疫有關(guān)的疾病的診斷及發(fā)病機(jī)制的研究,均有重要意義。
(4)各種半抗原物質(zhì):某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原,可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上,組成人工結(jié)合的*抗原。用其免疫動物,制備出各種半抗原的抗體,應(yīng)用于各種半抗原物質(zhì)的檢測,例如對某些病人在服用藥物后進(jìn)行血中藥物濃度的監(jiān)測。對運動員進(jìn)行服用違禁藥品的檢測,都是應(yīng)用半抗原檢測的方法。
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