紫外可見近紅外分光光度計應用方法

定量測定的應用方法

多波長紫外分光光度法

多波長分光光度法解決了單波長分光光度法中濁度背景干擾和共存物質的光譜干擾問

題。多波長分光光度法適用于混濁樣品，高濃度樣品以及多組分混合物的定量分析。

一、雙波長紫外分光光度法

雙波長分光光度法的特點是以樣品濃度本身做參比，用兩束單色光 λ₁ 和 λ₂ 交替入射到

同一樣品溶液中，測得的是差吸光度⊿A＝⊿λ₁－⊿λ₂，⊿A 與樣品溶液濃度或含量成正比，

而：

⊿A＝Aλ₂－Aλ₁＝（ελ₂－ελ₁）CL （2－14）

因此該法可用于定量分析，雙波長紫外分光光度法適用于樣品溶液單組分測定和多組分測

定。多組分測定主要采用等吸收點法和系數(shù)倍率法。

單組分測定一般選擇待測組分的 λ_ma_x 為測定波長 λ₂，等吸收點波長或待組分吸收曲線

下端的某一波長作為參比波長 λ₁，然后測定差吸光度值（⊿A＝Aλ₂－Aλ₁），求樣品溶液中

待測組分的含量或濃度。

如果樣品溶液中有共存干擾吸收物質，則通常采用等吸收點法和系數(shù)倍率法等。下面

簡單介紹這兩種方法。

1、等吸收點法

等吸收點波長的確定可采用作圖法、一波長固定另一波長掃描法、精密確定法和快速

簡便法等。這些內容已有許多專著供參考。用等吸收波長法消除干擾吸收時，必須滿足，在

干擾組分的吸收光譜中有等吸收點，使差吸光度值⊿A 足夠大。混合樣品溶液兩組分的等吸

收點波長 λ₂ 和 λ₁ 有這樣特點：差吸光度⊿A＝Aλ₂－Aλ₁，只與其中一組分濃度有關，而與

另一組分濃度無關，這是該法的定量基礎；另外應該指出等吸收點波長既可做參比波長，也

可做測定波長。等吸收點法主要用于二組分體系的測定。下面舉一些應用實例，以加深等吸

收點法的理解。

（1）有機化合物的測定實例

① 均四甲苯和聚苯乙烯的測定，均四甲苯和聚苯乙烯混合物等吸收點波長利用作圖法

求得 λ₁＝280.7nm，λ₂＝261.8nm（見圖 1）。在這兩波長處，對均四甲苯來說（不論濃

度大小），其⊿A＝Aλ₂－Aλ₁＝0，換言之，⊿A只與聚苯乙烯濃度有關，所以在這兩

個選定波長處測定混合樣品的吸光度差值⊿A 就可直接求得聚苯乙烯的含量。

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圖 1：均四甲苯和聚苯乙烯混合樣品的 UV 吸收光譜

圖中 聚苯乙烯（4×10^-3 mol/l）

 均四甲苯（1×10^-3 mol/l）

② 2，4，6 三氯*存在下苯本分含量的測定 2，4，6 三氯*和*混合樣品等吸

收點波長 λ₁＝268 nm（或 325 nm），λ₂＝270 nm（圖 2 為作圖法選擇等吸收點波長；圖

3 為掃描法，即*的 λ_ma_x＝270 nm 為固定波長，對濃度不同的 2，4，6 三氯*溶

液進行掃描求得）。同樣道理，選擇這兩個波長并測定在 λ₂ 和 λ₁ 處的吸光度差值⊿A。

⊿A 只與*濃度有關，而與 2，4，6 三氯*濃度無關，所以由⊿A 值便可測定苯

酚的含量。在鄰硝基*存在下，對硝基*的測定也可用雙波長分光光度法測定。

圖 2：2,4,6-三氯*和*的 UV 吸收光譜

a.*；b.2,4,6-三氯*（濃度為 30ppm）

〔 λ₁=286（或 325）nm，λ₂=270nm 〕

圖 3：固定* λ₂=270nm，對不同濃度

不同濃度的 2,4,6-三氯*溶液掃描的差吸

收 UV 光譜

③間－苯二甲酸存在下對－苯二甲酸的測定 利用作圖法選擇間－苯二甲酸

（10mg/10ml）和對－苯二酸甲（0.5mg/100ml）的等吸收點波長為 λ₂＝262.5nm 和 λ₁

＝277.0nm（見圖 4），在此波長組合下，間－苯二甲酸的⊿Aλ₂－λ₁＝0，對－苯二甲酸

的標準曲線線性良好，測定結果令人滿意。

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圖 4：間-苯二甲酸和對-苯二甲酸的 UV 吸收光譜

1—間-苯二甲酸；2—鄰-苯二甲酸

④ 苯偏三酸酐中苯偏三酸的測定 用作圖法和精密確定法選擇等吸收波長為

307.6nm，而苯偏三酸的 λ_ma_x＝290nm（見圖 5）。由圖可知，用雙波長光度法測得⊿A

＝Aλ₂－Aλ₁，只與苯偏三酸濃度有關，⊿A 與苯偏三酸酐濃度無關。故可利用雙波長

紫外光度法測定苯偏三酸含量。

圖 5：苯偏三酸酐和苯偏三酸的 UV 吸收光譜

1—苯偏三酸酐；2—苯偏三酸

（2）在無機分析中的實例

當樣品溶液中有兩組分的性質相近時，例如鈷與锝、鐵與鋁、鉑與鈀等，這些組分所

形成的絡合物的吸收光譜相互重疊，且能夠找到各自的等吸收點，均可采用雙波長分光光度

法對共存組分分別測定。如用 8－羥基喹啉同時測定鐵、鋁就是一例。

 圖 6 為鋁和鐵的絡合物吸收光譜，顯然測定波長 λ₁＝385.0nm。圖 7 為一波長固定

（385.0nm）、一波長掃描所得的曲線，等吸收點波長（λ₂^′＝437.0nm，和 λ₂＝499.5nm）可

做參比波長，顯然⊿A＝Aλ₁－Aλ₂^′或 ⊿A＝Aλ₁－Aλ₂ 都消除了干擾組分的影響。

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圖 6：鋁（A）鐵（B）的絡和物吸收光譜

（λ₁＝385 nm，λ₂’＝263nm，

λ₂＝498 nm）

圖 7：一波長固定（385nm）一波長掃描所得

的曲線

Fe₂O₃ 濃 度 (µg/10ml)A—20.0 ； B—60.0 ；

C—100.0

（3）藥物和維生素測定實例

① 復方頭孢氨芐膠囊中頭孢氨芐的測定 用作圖法求得頭孢氨芐和甲氧芐氨嘧啶

（TMP）混合物等吸收點波長 λ₁＝305.5 nm，λ₂＝263nm（頭孢氨芐的 λ_ma_x），以 λ₂ 為

測定波長，λ₁ 為參比波長，測量混合物樣品的⊿A，⊿A 只與頭孢氨芐濃度有關（見圖

8）。因此，可由一系列頭孢氨芐的乙醇標準溶液，分別在 λ₂＝263nm 和 λ₁＝305.5nm

處測定吸光度，并求出⊿A，以⊿A 為縱坐標，以頭孢氨芐濃度為橫坐標，繪制標準曲

線。然后按同樣方法測定樣品中⊿A，在標準曲線上查出對應頭孢氨芐的濃度或含量^[7^]。

② 雙嘧啶片中甲氧芐氨嘧啶（TMP）的測定 用作圖法求得 TMP 和*（SD）

的等吸收點波長，λ₂＝274.8nm（為測定波長），λ₁＝308nm（為參比波長），在這兩波

長處測得只與 TMP 濃度有關，與 SD 濃度無關。然后可用標準曲線法，求得樣品中 TMP

 的含量（圖 9）^[8^]。

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圖 8：頭孢氨芐和 TMP 的 UV 吸收光譜

1－頭孢氨芐；2－TMP；

3－頭孢氨芐+TMP

圖 9：TMP 和 SD 的 UV 吸收光譜

a－TMP(30µg/ml)；b－SD(24µg/ml)；

c－輔料

③ 維生素 A 和 E 的測定 維生素 A 的測定波長選在 305nm，維生素 E 對應等吸收波

長為 270.8nm（見圖 10）。用雙波長紫外分光光度法測定⊿A＝Aλ₃0₅－Aλ₂07.₈，則⊿A 只與

維生素 A 含量有關（與維生素 E 含量無關），故可測定維生素 A 含量。

圖 10：維生素 A、E 的 UV 吸收光譜

1－維生素 A；2－維生素 E

而維生素 E 的 λ_ma_x＝292nm 做測定波長，用精密確定法找出維生素 A 對應等吸收點波

長為 349.9nm，顯然，⊿A＝Aλ₂9₂－Aλ₃49.₉ 只與維生素 E 含量有關，可用雙波長紫外分光光

度法測定。

雙波長紫外分光光度法的出現(xiàn)，使藥物分析出現(xiàn)了迅猛發(fā)展，許多藥劑中的混合組分都可用

此法測定，例如，復方丁氯喘片中的鹽酸溴已胺（λ_ma_x＝314nm）、鹽酸異丙嗪（λ_ma_x＝300nm）

可用雙波長紫外光度法測定。又如，阿斯匹林中水楊酸的含量可用⊿A＝Aλ₂60.8

－Aλ₂8₂ 的差吸收值定量，防腐劑中可在⊿A＝Aλ₂54.₄－Aλ₂99.₅ 和⊿A＝Aλ₂6₉－Aλ₂35.₅ 的差吸

光度分別測定山梨酸鉀和對－羥基安息香酸含量。

紫外可見近紅外分光光度計應用方法