廣東環(huán)揚(yáng)未來(lái)實(shí)驗(yàn)室科技有限公司
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醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室

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所  在  地廣州市

更新時(shí)間:2022-01-13 08:34:01瀏覽次數(shù):36次

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基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR實(shí)驗(yàn),其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,例如:*、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測(cè)和診斷,DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒定及法醫(yī)物證,動(dòng)、植物檢疫,動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測(cè),動(dòng)物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測(cè),轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等。醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室

醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室  醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室

PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域并設(shè)有走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。

前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū),擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)。實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長(zhǎng)為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。

1、樣本間交叉污染:

收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)外溢;不同樣本移液時(shí)忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖;移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時(shí)消毒滅菌;不同樣本同時(shí)開(kāi)蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散,相互交叉污染。

2、實(shí)驗(yàn)試劑污染:

主要是在 PCR 組分試劑加樣過(guò)程中,由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。 加樣過(guò)程中,因?yàn)?PCR 試劑對(duì)溫度十分敏感,需要通過(guò)冰浴使得 PCR 試劑和 PCR 板/管處于 0℃,但這個(gè)過(guò)程也是充滿了污染的風(fēng)險(xiǎn)的。

3、擴(kuò)增產(chǎn)物污染:

大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開(kāi)蓋,這是 PCR 反應(yīng)中主要zui常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)?PCR 產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 PCR 檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限,所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染,就可形成假陽(yáng)性。

4、克隆質(zhì)粒污染:

作為陽(yáng)性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。

按照實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序,所有操作符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》(GB19489-2008)。

5、嚴(yán)格執(zhí)行各區(qū)功能劃分:

試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū):貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。

標(biāo)本制備區(qū):核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對(duì)于涉及臨床樣本的操作,應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。

擴(kuò)增區(qū):cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定,如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測(cè)序等。

試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增區(qū)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)用品,包括移液器等器具應(yīng),空氣、物品流向依次為:試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū),不可逆行。

6、清潔的實(shí)驗(yàn)用品:

實(shí)驗(yàn)室自配試劑(去離子水、緩沖液等)和所有使用器具在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或紫外殺菌。槍尖、反應(yīng)管等實(shí)驗(yàn)耗材應(yīng)一次性使用。

7、正確的實(shí)驗(yàn)操作:

實(shí)驗(yàn)應(yīng)在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行,工作臺(tái)內(nèi)應(yīng)放置PCR的微量離心機(jī)、各量程的移液器和其他必須物品。

實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中選擇合適尺寸的手套并能及時(shí)更換,在進(jìn)出不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域或進(jìn)行模板操作后都應(yīng)更換實(shí)驗(yàn)服、口罩、帽子及手套,以避免不同實(shí)驗(yàn)區(qū)交叉污染。

裝有PCR試劑的反應(yīng)管在打開(kāi)之前應(yīng)先瞬時(shí)離心,將管壁及管蓋上的液體離至管底,降低污染手套或加樣器的風(fēng)險(xiǎn);謹(jǐn)慎開(kāi)啟反應(yīng)管,防止管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠導(dǎo)致污染。

吸加試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)范要求進(jìn)行,遵守“慢吸快打”原則,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以避免氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。

PCR試劑建議小量分裝,以減少反復(fù)凍融、重復(fù)取樣次數(shù);多樣本PCR反應(yīng)時(shí),先配制反應(yīng)混合液分裝至反應(yīng)管中,后加入樣本核酸,請(qǐng)勿同時(shí)開(kāi)蓋,盡量保證單人單管,實(shí)現(xiàn)*閉管操作。

實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)與樣品和PCR產(chǎn)物分開(kāi)保存,不應(yīng)放于同處。

PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)完成后及時(shí)將反應(yīng)管取出,用一次性手套將產(chǎn)物反應(yīng)管包裹丟棄,保證管蓋緊閉。

8、規(guī)范的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):

應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定,實(shí)驗(yàn)中設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照,全程質(zhì)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程,驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,并協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性。

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