1、適用范圍

適用于奶粉、蛋白粉中乙基香蘭素的檢測。（參考標(biāo)準：GB 1886.283-2016）

2、溶液的配置

1）標(biāo)準儲備液：分別稱取乙基香蘭素 10mg，分別用乙腈溶解并定容到 10mL，濃度為 1000mg/L。

2）20%甲醇：移取 20mL 的甲醇，用水定容至 100mL。

3）5%乙酸甲醇：移取 5mL 乙酸，用甲醇定容至 100mL。

4）50%乙腈：移取 50mL 的乙腈，用水定容至 100mL。

3、提取步驟

奶粉

1）移取 1g 樣品，加入 10mL 的水，振蕩，超聲 10min，離心 10min（8000r/min），吸取上清液；

2）再加入 10mL 水，振蕩，超聲 10min，離心 10min（8000r/min），吸取上清液；

3）重復(fù) 2）的過程，合并所有上清液，混勻，再次離心 2min,待凈化。

蛋白粉

移取 0.5g 樣品，加入 10mL 的水振蕩，8000rpm 下離心，取澄清液，再重復(fù) 2 次，總計 30mL 水提

取，待凈化。

4、SPE 凈化步驟

SPE 柱：月旭 Welchrom® P-SAX 規(guī)格：150 mg/6mL。

活化：5 mL 甲醇、5 mL 水，棄去；

上樣：待凈化液 15mL 上樣，控制流速，不宜過快，棄去；

淋洗：6mL20%甲醇水淋洗，棄去。

洗脫：15mL5%乙酸甲醇洗脫，收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，并抽干小柱。

復(fù)溶：洗脫液在 45℃下減壓蒸干，用 50%乙腈定容至 1mL。過 0.22μm 濾膜，上 HPLC 檢測。

5、注意事項

1）由于基質(zhì)本身含目標(biāo)物，根據(jù)其含量進行加標(biāo)。0.5g 蛋白粉中移取 0.3mL 1000mg/L 乙基香蘭素，

得到加標(biāo)水平乙基香蘭素 60mg/kg，終上機濃度為乙基香蘭素 15mg/L；1g 奶粉中移取 0.01mL

1000mg/L 乙基香蘭素，得到加標(biāo)水平乙基香蘭素 10mg/kg，終上機濃度為乙基香蘭素 5mg/L

2）經(jīng)試驗，超聲后提取會更*；

6、色譜條件

色譜柱：月旭 Ultimate®LP-C18 4.6×250mm,5μm

流動相：A-0.1%磷酸溶液，B-甲醇

流速：1.0mL/min

柱溫：30℃

進樣量：20μL

檢測波長：280nm