1、適用范圍

適用于食品中檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅等 7 種著色劑的測(cè)定（本

實(shí)驗(yàn)用青豆為基質(zhì)）

參考標(biāo)準(zhǔn)：《GB 5009.35-2016 食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品中合成著色劑的測(cè)定》

2、溶液的配置

1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱(chēng)取 7 種色素 50mg，用 pH 為 6 的水溶解并定容到 50mL，濃度為 1000mg/L。

2）100mg/L 標(biāo)準(zhǔn)使用液：移取 7 種色素 1000mg/L 單標(biāo) 5mL，用 pH 為 6 的水溶解并定容到

50mL，濃度為 100mg/L

3）乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱(chēng)取 1.54g 乙酸銨，加水至 1000mL，溶解，經(jīng) 0.45µm 濾膜過(guò)濾。

4）甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇 60 mL，甲酸 40 mL，混勻。

5）檸檬酸溶液：稱(chēng)取 20 g 檸檬酸（C6H8O7·H2O），加水至 100 mL，溶解混勻。

6）氨水溶液：量取 2mL 氨水，加水至 100mL

7）無(wú)水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取無(wú)水乙醇 70mL，氨水溶液（6）水 10mL，混勻。

8）pH=6 的水：水加檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至 pH 到 6。

9）pH=4 的水：水加檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至 pH 到 4。

10）提取液：量取 100ml 乙醇，50ml 乙腈，混合均勻后，量取 140ml 乙醇乙腈混合溶液，再加入

60ml 水，2ml 氨水。

3、提取步驟

1) 取2.0 g樣品，加入20 mL提取液，振蕩2 min，40℃水浴超聲提取10 min，6000 rpm下離心2 min，

收集上清液；

2) 取下層殘留物，加入 10 mL 提取液，振蕩 2 min，40℃水浴超聲提取 15 min，6000 rpm 下離心 2

min，收集上清液；

3) 將下層殘留物用 10mL 提取液，按照步驟(2)重復(fù)提取一次，合并三次上清液；

4) 將上清液在 40℃水浴條件下，減壓蒸至約 15 mL，再加入 3 mL 甲酸混勻，待凈化。

4、SPE 凈化步驟

SPE 柱：月旭 Welchrom®PA 規(guī)格：1000 mg/6mL。

活化：5 mL 甲醇、5 mL 水，5 mL pH=6 的水，棄去；

上樣：待凈化液全部上樣，控制流速，不宜過(guò)快，棄去；

淋洗：10 mL pH = 4 的水，20 mL 甲醇-甲酸（6+4）洗去天然色素，10 mLpH=7 的水洗至中性，

棄去

洗脫：15mL 無(wú)水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液，收集于蒸發(fā)皿中，抽干

將洗脫液置于 80 ℃水浴揮干，用水定容至 5 mL，過(guò) 0.45μm 水膜，上機(jī)測(cè)定。

5、注意事項(xiàng)

1)加標(biāo)水平：2g樣中，分別加入0.1mL100mg/L混標(biāo)，終定容到5mL，因此加標(biāo)水平分別為5mg/kg。

終機(jī)讀數(shù)為 2mg/L，流動(dòng)相用水定容。

2)GB5009.35-2016 中赤蘚紅沒(méi)有采用 PA 吸附的方法，因赤蘚紅在 PA 柱上的吸附性很小，在淋洗

過(guò)程就會(huì)被大部分洗下來(lái)。

3)因?yàn)樘崛∫菏菈A性的，為了更好的保證小柱對(duì)合成著色劑的吸附，加 3mL 甲酸，使樣液呈酸性

SPE 凈化過(guò)程，控制流速，建議 1mL/min 左右（PA 小柱可適當(dāng)抽真空或加正壓）

4)后上機(jī)前，選用水系濾膜進(jìn)行過(guò)濾